Krav
Patentkrav1. Gnager, som omfatter i sitt kimbanegenom, på et endogent locus av den tunge kjede, en manipulert region av immunglobulin-diversiteten (DH) ("manipulert DH-region"), omfattende:(i) et DH-gensegment, som er umiddelbart naboliggende en 23-mer-RSS ("manipulert DH-gensegment"); og(ii) et ikke-rearrangert DH-gensegment, flankert på sin 5'-ende av en første 12-mer-RSS og på sin 3'-ende av en andre 12-mer-RSS ("ikke-rearrangert DH-gensegment"),hvor (i) det manipulerte DH-gensegment og (ii) det ikke-rearrangerte DH-gensegment er operabelt koblet slik at (i) det manipulerte DH-gensegment og (ii) det ikke-rearrangerte DH-gensegment er i stand til å forbinde seg i en DH-DH-rekombinasjonshendelse ifølge 12/23-regelen, ogvalgfritt hvor den manipulerte DH-region omfatter kun humane DH-gensegmenter.2. Gnager ifølge krav 1, hvor det endogene locus av den tunge kjede videre omfatter:(a) i det minste ett ikke-rearrangert variabelt gensegment av den tunge immunglobulinkjede (VH), som er oppstrøms av og operabelt koblet til den manipulerte DH-region;(b) i det minste ett ikke-rearrangert forbindende gensegment av den tunge immunglobulinkjede (JH), som er nedstrøms av og operabelt koblet til den manipulerte DH-region; eller(c) en kombinasjon av (a) og (b).3. Gnager ifølge krav 2, hvor:(a) det i det minste ene ikke-rearrangerte VH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant VH6-1-gensegment, det i det minste ene ikke-rearrangerte JHgensegment omfatter et ikke-rearrangert humant JH6-gensegment, eller en kombinasjon derav;(b) det i det minste ene ikke-rearrangerte JH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant JH4-gensegment, et ikke-rearrangert JH5-gensegment og et ikke-rearrangert humant JH6-gensegment;(c) det i det minste ene ikke-rearrangerte JH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant JH1-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH2-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH3-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH4-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH5-gensegment og et ikke-rearrangert humant JH6-gensegment, valgfritt hvor det ikke-rearrangerte humane JH1-gensegment, det ikke-rearrangerte humane JH2-gensegment, det ikke-rearrangerte humane JH3-gensegment, det ikke-rearrangerte humane JH4-gensegment, det ikkerearrangerte humane JH5-gensegment og det ikke-rearrangerte humane JH6-gensegment er i kimbanekonfigurasjon; og/eller(d) det i det minste ene ikke-rearrangerte VH-gensegment omfatter det fullstendige repertoar av funksjonelle ikke-rearrangerte humane VH-gensegmenter som strekker seg mellom og innbefatter et ikke-rearrangert humant VH3-74-gensegment og et ikke-rearrangert humant VH1-6-gensegment ("fullstendig repertoar av funksjonelle ikke-rearrangerte humane VH-gensegmenter"), valgfritt hvor det fullstendige repertoar av funksjonelle ikke-rearrangerte humane VH-gensegmenter er i kimbanekonfigurasjon.4. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor:(a) gnagerens kimbanegenom omfatter ett eller flere funksjonelle gnager-Adam6-gener, valgfritt hvor det ene eller de flere funksjonelle gnager-Adam6-gener befinner seg mellom et humant VH1-2-gensegment og et humant VH6-1-gensegment og/eller erstatter et humant Adam6-gen;(b) det manipulerte DH-gensegment omfatter 23-mer-RSS-en umiddelbart naboliggende 5'-enden av DH-gensegmentet; (c) det manipulerte DH-gensegment omfatter 23-mer-RSS-en umiddelbart naboliggende 3'-enden av DH-gensegmentet;(d) den manipulerte DH-genregion omfatter:(i) et humant DH3-3-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, valgfritt hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 5'-enden av DH3-3-gensegmentet;(ii) et humant DH2-2-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, valgfritt hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 3'-enden av DH2-2-gensegmentet;(iii) et humant DH2-8-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, valgfritt hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 3'-enden av DH2-8-gensegmentet;(iv) et humant DH2-15-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, valgfritt hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 3'-enden av DH2-15-gensegmentet; eller(v) en hvilken som helst kombinasjon av (i)-(iv);(e) gnagerens kimbanegenom omfatter nukleotidsekvensen ifølge SEQ ID NO:52 eller omfatter nukleotidsekvensen ifølge SEQ ID NO:61;(f) gnagerens kimbanegenom omfatter nukleotidsekvensen ifølge SEQ ID NO:70; (g) gnagerens kimbanegenom omfatter nukleotidsekvensen ifølge SEQ ID NO:71; og/eller(h) gnagerens kimbanegenom omfatter nukleotidsekvensen ifølge SEQ ID NO:72.5. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnagerens kimbanegenom omfatter, på det endogene locus av den tunge kjede og i operabel kobling fra 5' til 3':(a) i det minste ett ikke-rearrangert humant VH-gensegment; (b) den manipulerte DH-region, hvor det manipulerte DH-gensegment omfatter et humant DH3-3-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 5'-enden av det humane DH3-3-gensegment; og(c) i det minste ett ikke-rearrangert humant JH-gensegment.6. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnagerens kimbanegenom omfatter, på det endogene locus av den tunge kjede og i operabel kobling fra 5' til 3':(a) i det minste ett ikke-rearrangert humant VH-gensegment;(b) den manipulerte DH-region, hvor det manipulerte DH-gensegment omfatter et humant DH2-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS-en, hvor 23-mer-RSS-en er umiddelbart naboliggende 3'-enden av det humane DH2-gensegment, valgfritt hvor:(i) det manipulerte DH-gensegment omfatter et humant DH2-2-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS;(ii) det manipulerte DH-gensegment omfatter et humant DH2-8-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS;(iii) det manipulerte DH-gensegment omfatter et humant DH2-15-gensegment umiddelbart naboliggende 23-mer-RSS; eller(iv) en hvilken som helst kombinasjon av (i)-(iii); og(c) i det minste ett ikke-rearrangert humant JH-gensegment.7. Gnager ifølge krav 5 eller krav 6, hvor:(a) det i det minste ene ikke-rearrangerte humane VH-gensegment omfatter fra 5' til 3' et ikke-rearrangert humant VH1-2-gensegment og et ikke-rearrangert humant VH6-1-gensegment, hvor kimbanegenomet videre omfatter ett eller flere funksjonelle gnager-Adam6-gener mellom det ikke-rearrangerte humane VH1-2-gensegment og det ikke-rearrangerte humane VH6-1-gensegment, og hvor det ikke-rearrangerte humane VH1-2-gensegment, det ene eller de flere funksjonelle gnager-Adam6-gener og det ikke-rearrangerte humane VH6-1-gensegment er sammenhengende; (b) det i det minste ene ikke-rearrangerte humane VH-gensegment omfatter det fullstendige repertoar av funksjonelle ikke-rearrangerte humane VH-gensegmenter, valgfritt hvor det fullstendige repertoar av funksjonelle ikke-rearrangerte humane VH-gensegmenter er i kimbanekonfigurasjon; og/eller(c) det i det minste ene ikke-rearrangerte humane JH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant JH6-gensegment, valgfritt hvor:(i) det i det minste ene ikke-rearrangerte humane JH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant JH4-gensegment, et ikke-rearrangert JH5-gensegment og det ikke-rearrangerte humane JH6-gensegment; og/eller(ii) det i det minste ene ikke-rearrangerte humane JH-gensegment omfatter et ikkerearrangert humant JH1-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH2-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH3-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH4-gensegment, et ikke-rearrangert humant JH5-gensegment og et ikke-rearrangert humant JH6-gensegment, videre valgfritt hvor det ikke-rearrangerte humane JH1-gensegment, det ikke-rearrangerte JH2-gensegment, det ikke-rearrangerte JH3-gensegment, det ikke-rearrangerte JH4-gensegment, det ikke-rearrangerte JH5-gensegment og det ikke-rearrangerte JH6-gensegment er i kimbanekonfigurasjon.8. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnagerens kimbanegenom videre omfatter, operabelt koblet til den manipulerte DH-region: (a) et konstant regiongen av den tunge immunglobulinkjede (CH) eller et avsnitt derav;(b) et gnager-CH-regiongen eller et avsnitt derav;(c) et gnager-CH-regiongen eller et avsnitt derav, omfattende en intronisk gnagerforsterkerregion og et gnager-IgM-gen; og/eller (d) en legemiddelutvalgskassett som befinner seg oppstrøms av det manipulerte DH-gensegment, valgfritt hvor legemiddelutvalgskassetten er flankert av ett eller flere stedsspesifikke rekombinasjonssteder.9. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnageren er homozygot for den manipulerte DH-region.10. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnageren omfatter:(a) i det minste ett ikke-rearrangert humant variabelt gensegment av den tunge immunglobulinkjede (VH) som er oppstrøms av og operabelt koblet til den manipulerte DH-region;(b) den manipulerte DH-region, hvor det manipulerte DH-gensegment og det ikkerearrangerte DH-gensegment er humane; og(c) i det minste ett ikke-rearrangert humant forbindende gensegment av den tunge immunglobulinkjede (JH) som er nedstrøms av og operabelt koblet til den manipulerte DH-region,hvor (a), (b) og (c) er operabelt koblet til et gen for en konstant region av den tunge immunglobulinkjede av gnageren på det endogene locus av den tunge kjede.11. Gnager ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, hvor gnageren er en rotte.12. Gnager ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, hvor gnageren er en mus.13. Fremgangsmåte for fremstilling av et antistoff eller oppnåelse av en nukleinsyre som koder for det samme, idet fremgangsmåten omfatter å immunisere en gnager ifølge et hvilket som helst av kravene 1 til 12 med et antigen; ogå tillate at gnageren danner en immunrespons på antigenet, innbefattende et antistoff som binder til antigenet, eller en nukleinsyre som koder for det samme.14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, som videre omfatter å gjenvinne antistoffet, eller nukleinsyren som koder for det samme, fra gnageren.15. Fremgangsmåte ifølge krav 13 eller 14, hvor nukleinsyren omfatter kodende sekvenser for en ikke-rearrangert tung kjede VH(DHA-DHB)JH, som koder et variabelt domene av den tunge immunglobulinkjede.