Krav
Patentkrav1. Et polynukleotid som koder for en kimær antigenreseptor (CAR), hvor:(i) CAR-en omfatter: (a) et ekstracellulært antigen-bindende domene som spesifikt gjenkjenner B-cellemodningsantigen (BCMA); (b) en spacer på minst 125 aminosyrer i lengde;(c) et transmembran-domene; og (d) en intracellulær signalregion; og (ii) nukleinsyren sekvens som koder for spaceren omfatter minst ett modifisert spleisedonor- og/eller spleiseakseptorsete, hvor det modifiserte spleisedonor- og/eller akseptorsetet omfatter én eller flere nukleotidmodifikasjoner som svarer til et referanse spleisedonor- og/eller akseptorsete inneholdt i sekvensen angitt i SEKV ID NR:621; hvor: det modifiserte spleisedonorsetet er angitt i agtctaaatacggac (SEKV ID NR:661), tcaactggtatgtgg (SEKV ID NR:662), accatctccaaggcc (SEKV ID NR:663) og/eller gccccaggtttacac (SEKV ID NR:664); og/ellerdet modifiserte spleiseakseptorsetet er angitt i cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa (SEKV ID NR:672), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc (SEKV ID NR: 673) og/eller cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct (SEKV ID NR:766).2. Polynukleotidet ifølge krav 1, hvor det modifiserte spleisedonorsetet er angitt i SEKV ID NR:662 og/eller det modifiserte spleiseakseptorsetet er angitt i SEKV ID NR: 672.3. Polynukleotidet ifølge krav 1 eller 2, hvor etter ekspresjon av polynukleotidet i en human celle viser RNA-et fra polynukleotidet:(a) minst 70 %, 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, eller 95 % RNA homogenitet; og/eller(b) redusert heterogenitet sammenlignet med heterogeniteten av mRNA-et transkribert fra et referanse polynukleotid, hvor nevnte referanse polynukleotid koder for den samme aminosyresekvensen som polynukleotidet, hvor referanse polynukleotidet er forskjellig ved nærværet av ett eller flere spleisedonorseter og/eller ett eller flere spleiseakseptorseter i nukleinsyren som koder for spaceren og/eller omfatter ett eller flere nukleotidmodifikasjoner sammenlignet med polynukleotidet og/eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:621.4. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-3, hvor den kodede spaceren omfatter en sekvens av en hengselregion, en CH2-region og en CH3-region.5. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-4, hvor den kodede spaceren er eller omfatter (i) sekvensen angitt i SEKV ID NR: 649; (ii) en funksjonell variant med SEKV ID NR:649 som har minst 95 %, 96 %, 97 %, 98 % eller 99 % sekvensidentitet med SEKV ID NR:649; eller(iii) en sammenhengende del av (i) eller (ii) som er minst 125 aminosyrer i lengde.6. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-5, hvor spaceren er kodet av nukleotidsekvensen angitt i SEKV ID NR:622.7. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-6, hvor polynukleotidet er kodon- optimalisert for ekspresjon i en human celle.8. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-7, hvor det kodende antigenbindende domenet er et antistoff-fragment som omfatter en variabel tung kjede (VH)region og en variabel lett kjede (VL)-region.9. Polynukleotidet ifølge krav 8, hvor:VH-regionen og VL-regionene omfatter aminosyresekvensen angitt i henholdsvis SEKV ID NR:617 og 618, eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % identitet med henholdsvis SEKV ID NR:617 og 618; eller VH-regionen og VL-regionene omfatter aminosyresekvensen angitt i henholdsvis SEKV ID NR:256 og 267, eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % identitet med henholdsvis SEKV ID NR:256 og 267; eller VH-regionen og VL-regionene omfatter aminosyresekvensen angitt i henholdsvis SEKV ID NR:519 og 535, eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % identitet med henholdsvis SEKV ID NR:519 og 535; eller VH-regionen og VL-regionene omfatter aminosyresekvensen angitt i henholdsvis SEKV ID NR:115 og 536, eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % identitet med henholdsvis SEKV ID NR:115 og 536; eller VH-regionen og VL-regionene omfatter aminosyresekvensen angitt i henholdsvis SEKV ID NR:609 og 610, eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % identitet med henholdsvis SEKV ID NR:609 og 610.10. Polynukleotidet ifølge krav 8 eller 9, hvor:VH-regionen omfatter en CDR-H1, CDR-H2, og CDR-H3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:593, 594, og 595, og VL-regionen omfatter en CDR- L1, CDR-L2, og CDR-L3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:601, 602, og 603, eller VH-regionen omfatter en CDR-H1, CDR-H2, og CDR-H3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:2, 5, og 157, og VL-regionen omfatter en CDR-L1, CDR-L2, og CDR-L3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR: 178, 183, og 194; eller VH-regionen omfatter en CDR-H1, CDR-H2, og CDR-H3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR: 1, 4, og 7, og VL-regionen omfatter en CDR-L1, CDR-L2, og CDR-L3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:380, 400, og 416; eller VH-regionen omfatter en CDR-H1, CDR-H2, og CDR-H3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:2, 5, og 10, og VL-regionen omfatter en CDR-L1, CDR-L2, og CDR-L3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:33, 43, og 421; eller VH-regionen omfatter en CDR-H1, CDR-H2, og CDR-H3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:507, 513, og 517, og VL-regionen omfatter en CDR- L1, CDR-L2, og CDR-L3 som omfatter aminosyresekvensen med henholdsvis SEKV ID NR:589, 590, og 591.11. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 8-10, hvor: VH-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR: 617; og VL-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR:618;VH-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR: 256; og VL-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR:267;VH-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR: 519; og VL-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR:535;VH-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR: 115; og VL-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR:536; ellerVH-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR: 609; og VL-regionen er eller omfatter aminosyresekvensen angitt i SEKV ID NR:610.12. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 8-11, hvor fragmentet omfatter en scFv.13. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 8-12, hvor VH-regionen er amino- terminal til VL-regionen eller VH-regionen er karboksy-terminal til VL-regionen.14. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 8-13, hvor:(a) det antigen-bindende domenet omfatter aminosyresekvensen valgt fra en hvilken som helst av SEKV ID NR: 478, 278, 559, 560, eller 442 eller en aminosyresekvens som har minst 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, eller 99 % sekvensidentitet med aminosyresekvensen valgt fra en hvilken som helst av SEKV ID NR: 478, 278, 559, 560, eller 442; og/eller(b) nukleinsyren som koder for det antigen-bindende domenet omfatter sekvensen av nukleotider angitt i hvilken som helst av SEKV ID NR: 460, 440, 715, 717 eller 719. 15. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-14, hvor den intracellulære signalregionen omfatter et aktiverende cytoplasmatisk signaldomene, hvor det aktiverende cytoplasmatisk signaldomenet er i stand til å indusere et primært aktiveringssignal i en T-celle, er en T-cellereseptor (TCR)-komponent og/eller omfatter et immunreseptor-tyrosinbasert aktiveringsmotiv (ITAM).16. Polynukleotidet ifølge krav 15, hvor det aktiverende cytoplasmatisk signaldomenet er eller omfatter et cytoplasmatisk signaldomene av en CD3-zeta (CD3ζ)-kjede eller en funksjonell variant eller signaldel derav.17. Polynukleotidet ifølge krav 16, hvor:(a) det cytoplasmatiske signaldomene er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:628 eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 % sekvensidentitet med SEKV ID NR:628, og/eller(b) nukleinsyren som koder for det cytoplasmatiske signaldomene er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:627 eller er en kodon-optimalisert sekvens og/eller degenerert sekvens derav, og/eller(c) nukleinsyren som koder for det cytoplasmatiske signaldomene er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:652.18. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 15-17, hvor den intracellulære signalregionen videre omfatter en ko-stimulerende signalregion.19. Polynukleotidet ifølge krav 18, hvor den ko-stimulerende signalregionen omfatter et intracellulært signaldomene av en CD28, en 4-1BB eller en ICOS eller en signaldel derav.20. Polynukleotidet ifølge krav 19, hvor:(a) den ko-stimulerende signalregionen er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:626 eller en sekvens av aminosyrer som viser minst 90 % sekvensidentitet med sekvensen angitt i SEKV ID NR: 626, og/eller (b) nukleinsyren som koder for den ko-stimulerende regionen er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:625 eller er en kodon-optimalisert sekvens og/eller degenerert sekvens derav, og/eller(c) nukleinsyren som koder for den ko-stimulerende signalregionen omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:681, og/eller(d) den intracellulære signalregionen omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:628 eller en sekvens av aminosyrer som har minst 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, eller 99 % sekvensidentitet med SEKV ID NR:628 og sekvensen angitt i SEKV ID NR:626 eller en sekvens av aminosyrer som viser minst 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, eller 99 % sekvensidentitet med sekvensen angitt i SEKV ID NR: 626, og/eller(e) den intracellulære signalregionen er eller omfatter sekvensene angitt i SEKV ID NR:628 og SEKV ID NR:626.21. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-20, hvor transmembrandomenet er eller omfatter et transmembrandomene fra CD4, CD28, eller CD8.22. Polynukleotidet ifølge krav 21, hvor:(a) transmembrandomenet er humant eller er fra et humant protein, og/eller(b) transmembrandomenet er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:624 eller en sekvens av aminosyrer som viser minst 90 % sekvensidentitet med SEKV ID NR:624, og/eller(c) nukleinsyren som koder for transmembrandomenet er eller omfatter sekvensen angitt i SEKV ID NR:623 eller er en kodon-optimalisert sekvens og/eller degenerert sekvens derav.23. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-22, hvor polynukleotidet videre koder for en avkortet reseptor.24. Polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-23, hvor polynukleotidet omfatter sekvensen angitt i hvilken som helst av SEKV ID NR: 751-756 eller en sekvens som viser minst 85 %, 86 %, 87 %, 88 %, 89 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 %, eller 99 % sekvensidentitet med sekvensen angitt i hvilken som helst av SEKV ID NR: 751-756 og den kodede reseptoren beholder funksjonen med å binde til BCMA og beholder den reduserte RNA-heterogeniteten.25. E n vektor som omfatter polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-24.26. Vektoren ifølge krav 25, hvor vektoren er en virusvektor, eventuelt en retrovirusvektor eller en lentivirusvektor.27. En konstruerte celle, som omfatter polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-24 eller vektoren ifølge krav 25 eller 26.28. Den konstruerte cellen ifølge krav 27, hvor cellen er en immuncelle, eventuelt hvor:(a) immuncellen er en primærcelle hentet fra et individ, og/eller(b) immuncellen er en NK-celle eller en T-celle.29. En sammensetning som omfatter polynukleotidet ifølge hvilket som helst av krav 1-24 eller vektoren ifølge krav 25 eller 26, eller den konstruerte cellen ifølge krav 27 eller 28.30. Den konstruerte cellen ifølge krav 27 eller 28 eller sammensetningen ifølge krav 29, for anvendelse i en fremgangsmåte for behandling.31. Den konstruerte cellen ifølge krav 27 eller 28 eller sammensetningen ifølge krav 29, for anvendelse i en fremgangsmåte for å behandle en sykdom eller forstyrrelse assosiert med ekspresjon av B-cellemodningsantigen (BCMA). 32. Den konstruerte cellen eller sammensetningen for anvendelsen ifølge krav 31, hvor sykdommen eller forstyrrelsen assosiert med ekspresjon av B-cellemodningsantigen (BCMA) er multippelt myelom (MM).33. Den konstruerte cellen eller sammensetningen for anvendelsen ifølge krav 31 eller 32, hvor dosen av konstruerte T-celler omfatter mellom ved eller rundt 1 × 107 CAR-uttrykkende T-celler og ved eller rundt 2 × 109 CAR-uttrykkende T-celler.34. Den konstruerte cellen eller sammensetningen for anvendelsen ifølge et hvilket som helst av krav 31-33, hvor:(a) før administreringen, har individet mottatt en lymfodepletteringsterapi som omfatter administreringen av fludarabin ved eller rundt 20-40 mg/m2 kroppsoverflateareal av individet, daglig, i 2-4 dager, og/eller syklofosfamid ved eller rundt 200-400 mg/m2 kroppsoverflateareal av individet, i 2-4 dager, og/eller(b) individet har mottatt en lymfodepletteringsterapi som omfatter administreringen av fludarabin ved eller rundt 30 mg/m2 kroppsoverflateareal av individet, daglig, og syklofosfamid ved eller rundt 300 mg/m2 kroppsoverflateareal av individet, daglig, i 3 dager.35. De konstruerte cellene eller sammensetningen for anvendelsen ifølge hvilket som helst av krav 31-34, hvor ved eller før administreringen av dosen av celler, individet har mottatt tre eller flere tidligere behandlinger for sykdommen eller forstyrrelsen.36. De konstruerte cellene eller sammensetningen for anvendelsen ifølge hvilket som helst av krav 31-35, hvor:(a) ved tidspunktet for administreringen av dosen av celler, og/eller ved tidspunktet for lymfodepleterende kjemoterapi eller leukaferese, har individet ikke hatt aktiv eller historie med plasmacelleleukemi (PCL), og/eller (b) ved tidspunktet for administreringen av dosen av celler har individet utviklet sekundær plasmacelleleukemi (PCL), og/eller(c) ved tidspunktet for administrering, individet:(i) har tilbakefall eller vært refraktær etter minst 3 eller minst 4 tidligere behandlinger for multippelt myelom; og/eller(ii) er et voksent individ eller er 25 eller 35 år gammel eller eldre; og/eller(iii) har en tid fra diagnose av multippelt myelom på omtrent 4 år eller mellom 2 og 15 eller 2 og 12 år; og/eller(iv) har mottatt rundt 10 eller mellom 3 og 15 eller mellom 4 og 15 tidligere regimer for multippelt myelom; og/eller(v) har vært refraktær til eller ikke respondert på bortezomib, carfilzomib, lenalidomide, pomalidomid og/eller et anti-CD38 monoklonalt antistoff; og/eller(vi) har tidligere hatt autolog stamcelletransplantasjon eller har ikke tidligere hatt autolog stamcelletransplantasjon; og/eller(vii) har IMWG høyrisiko cytogenetikk.